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PCR儀試驗(yàn)的假陽(yáng)(陰)性擴(kuò)增現(xiàn)象探究

發(fā)布時(shí)間: 2021-11-22  點(diǎn)擊次數(shù): 1189次
   PCR儀已成為分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、食品工業(yè)、司法科學(xué)、生物技術(shù)、環(huán)境科學(xué)、微生物學(xué)、臨床診斷、流行病學(xué)、遺傳學(xué)、基因芯片、基因檢測(cè)、基因克隆、基因表達(dá)等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的一種儀器。在進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)若出現(xiàn)的假陽(yáng)(陰)性擴(kuò)增和假陰性擴(kuò)增現(xiàn)象該怎么去分析?
  1.假陽(yáng)性擴(kuò)增
  這是擴(kuò)增系統(tǒng)受到污染的表現(xiàn),應(yīng)通過(guò)檢查排除污染源。首先考慮是否為試劑污染,可將試劑分裝好直接置于PCR儀中擴(kuò)增進(jìn)行判斷。其次要考慮是否為實(shí)驗(yàn)室污染,可更換所用的移液器、吸咀管(離心管)等,將試驗(yàn)中的關(guān)鍵步驟轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的環(huán)境中,判斷是否為實(shí)驗(yàn)室污染。如果是則需要對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)室及實(shí)驗(yàn)器材*清洗處理,保持良好的通風(fēng)、清潔等。此外,還要考慮是否為采樣污染,一般表現(xiàn)為一批結(jié)果陽(yáng)性率很高,一批結(jié)果陽(yáng)性率又下降很多,如此反復(fù)。解決方法為盡量使用一次試管及吸咀取樣。
  2.假陰性擴(kuò)增
  首先要考慮是否為儀器故障,儀器應(yīng)正常運(yùn)轉(zhuǎn),尤其要注意加熱溫度及各管間的差異是否符合實(shí)驗(yàn)要求,是否出現(xiàn)誤差等。其次要考慮是否為試劑失效或無(wú)效引起,使用有效的試劑。
  PCR儀是利用DNA聚合酶用于擴(kuò)增特定的DNA片段,對(duì)特定基因做體外大量合成,可以將一段基因復(fù)制為原來(lái)的百億至千億倍。利用安捷倫*的酶融合技術(shù),梯度PCR儀可為您獲得更快、更好結(jié)果;其可靈活配備96和384孔加熱模塊并具優(yōu)異的梯度功能,用于加速實(shí)驗(yàn)方案開發(fā)。
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